二手液相二手高效液相色譜法的固定相、流動(dòng)相的要求和特點(diǎn)

二手液相二手高效液相色譜法 的固定相要求

要求：顆粒細(xì)且均勻、傳質(zhì)快、機(jī)械強(qiáng)度高、耐高壓，化學(xué)穩(wěn)定性好

液固：全多空硅膠、高庚子多空微球

二手液相二手高效液相色譜法 的流動(dòng)相要求

要求：化學(xué)穩(wěn)定性好；適宜溶解度；與檢測(cè)器相適應(yīng)；純度高；粘度低。

使用前經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾，除去固體顆粒，還要脫氣處理。
         

二手液相二手高效液相色譜法 的固定相

常用化學(xué)鍵和相的種類(lèi)
非極性鍵合相：十八烷基硅烷（ODS）最常用。一般用于反相色譜。長(zhǎng)鏈k大，載樣量高，穩(wěn)定性好。短鏈分離速度快，色譜峰對(duì)稱(chēng)性好，苯基鍵合與短鏈相似。
弱極性鍵合相：醚基和二羥基鍵合相，應(yīng)用較少。
極性鍵合相：氨基、氰基，一般用于正相色譜。氰基分離選擇性類(lèi)似于硅膠，對(duì)雙鍵有選擇性，對(duì)雙鍵異構(gòu)體，或含雙鍵數(shù)不同的環(huán)狀化合物有較好分離能力。一些硅膠上不能分離的極性強(qiáng)的化合物也可在氰基上分離。氨基鍵合相與酸性硅膠有不同性能，氨基可與糖分子羥基選擇性作用，從而分離糖。在酸性介質(zhì)中還是弱陰離子交換劑，能分離核苷酸。與羰基反應(yīng)。   鍵合相的性質(zhì)和特點(diǎn)
鍵合反應(yīng)：主要是硅氧烷型鍵合相，以氯硅烷與硅膠進(jìn)行硅烷化反應(yīng)而制的。
含碳量和覆蓋度：鍵合相表面基團(tuán)的鍵合量可以對(duì)鍵合硅膠進(jìn)行元素分析，用含碳的百分?jǐn)?shù)表示。覆蓋度參加反應(yīng)的硅醇基數(shù)目占硅膠表面硅醇基總數(shù)的比例。在鍵合反應(yīng)后用三甲基氯硅烷進(jìn)行鈍化處理，即封尾，減少對(duì)極性組分的吸附。
鍵合相特點(diǎn)：化學(xué)穩(wěn)定性好，壽命長(zhǎng)；均一性和重現(xiàn)性好；柱效高，選擇性好；適于梯度洗脫；載樣量大。   其他種類(lèi)固定相

鍵合型離子交換劑：常用陽(yáng)離子型鍵合相是強(qiáng)蘇醒磺酸類(lèi)；常用陰離子型鍵合相是季銨鹽類(lèi)；還有弱酸（堿）型離子交換劑。
手性固定相（CSP）：蛋白類(lèi)、多糖類(lèi)、環(huán)糊精、π-氫鍵型（刷型）、大環(huán)抗生素類(lèi)、配體交換、其他。載樣量小，穩(wěn)定性差且價(jià)格昂貴。
親和色譜固定相：配基和載體間有一適當(dāng)長(zhǎng)度間隔臂。

二手液相二手高效液相色譜法 的流動(dòng)相

流動(dòng)相對(duì)分離的影響

分離方程式：R=\frac{\sqrt{n}}{4}\cdot\frac{\alpha-1}{\alpha}\cdot\frac{k_2}{1+k_2}

選擇合適的溶劑強(qiáng)度使組分k在最佳范圍內(nèi)，選擇合適種類(lèi)的溶劑改善選擇性使α增大獲得良好分離度R>1.5

溶劑極性和強(qiáng)度

在化學(xué)鍵和色譜中溶劑洗脫能力即溶劑強(qiáng)度直接與它的極性相關(guān)。

溶劑極性用溶劑極性參數(shù)表示P^\prime，用以表示正相色譜中洗脫能力

反相鍵合相色譜溶劑強(qiáng)度用另一強(qiáng)度因子S表示

混合溶劑可以用P或S的加權(quán)平均表示