GC/Q-TOF氣相色譜/四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀方案應(yīng)用1

使用安捷倫 7200 系列 GC/Q-TOF 系統(tǒng)和 Mass Profiler Professional（MPP）軟件對(duì)酵母類固醇進(jìn)行了代謝輪廓分析，用來(lái)精確測(cè)定新型潛在抗真菌藥物的靶酶。將相對(duì)濃度 的麥角甾醇生物合成中間體的靶標(biāo)分析和非靶標(biāo)分析相結(jié)合，再賦予精確質(zhì)量的高分辨 GC/Q-TOF 技術(shù)，可以獲得最全面的結(jié)果。電子電離（EI）的全采集模式質(zhì)譜圖結(jié)合 MS/MS 產(chǎn)物離子質(zhì)譜數(shù)據(jù)，進(jìn)一步確保了酵母中藥物治療蓄積化合物定性的準(zhǔn)確性。

芽殖酵母釀酒酵母因?yàn)槠浜?jiǎn)單而且菌株可適用于基因組中所有基因的個(gè)體缺失而成為一 種廣受歡迎的模式生物。本研究使用釀酒酵母對(duì)新型抗真菌藥物進(jìn)行評(píng)價(jià)。這一藥物家 族以麥角甾醇，一種真菌細(xì)胞膜的重要組成部分為作用靶標(biāo)。麥角甾醇和動(dòng)物細(xì)胞中的 膽固醇功能相似。雖然如此，但很多參與酵母類固醇生物合成的酶在結(jié)構(gòu)和特異性上與 哺乳動(dòng)物細(xì)胞中相應(yīng)的酶有很大的差別。因此，那些抑制麥角甾醇生物合成路徑的藥物 通常具有抗真菌的治療潛力。這些藥物可以通過(guò)互補(bǔ)性遺傳和分析方法確定。作為分析 通量最高的方法，曾有文獻(xiàn)進(jìn)行過(guò) Haploinsufficiency Profiling（HIP）篩查 。HIP 涉及了基因缺失的酵母對(duì)藥物的生長(zhǎng)，造成菌株靈敏度升高，表明雜合位點(diǎn)的產(chǎn)物可能 是抑制劑的靶標(biāo)。除此之外，還可使用精確質(zhì)量高分辨氣相色譜/四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜 （GC/Q-TOF）聯(lián)用進(jìn)行酵母類固醇代謝物輪廓分析并與遺傳學(xué)相結(jié)合專用于潛在藥物的靶酶鑒定。

使用安捷倫 7890 氣相色譜和 7200 系列 Q-TOF 質(zhì)譜聯(lián)用儀通過(guò)定性藥物治療后，蓄積的化合物對(duì)新興抗真菌藥物的靶標(biāo)物進(jìn)行可靠的鑒定。首先用兩種明確效果的抗真菌藥物 對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證，接著對(duì)有潛在治療特性的新興藥物進(jìn)行測(cè)定。 較寬的儀器線性范圍允許在酵母細(xì)胞的濃度范圍內(nèi)同時(shí)量化脂類 代謝產(chǎn)物。 以麥角甾醇生物合成路徑中的靶中間體以及藥物治療蓄積的非靶 代謝物對(duì)非治療樣本的相對(duì)水平為基礎(chǔ)，提出了幾種潛在抗真菌 藥物作用于酵母中固醇代謝的機(jī)理。此外，使用 MS/MS 產(chǎn)物離 子的精確質(zhì)量譜圖結(jié)合 Molecular Structure Correlator（MSC） 工具對(duì)某些蓄積的代謝產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)。

7200 系列 GC/Q-TOF 是一個(gè)功能強(qiáng)大的分析工具，用來(lái)進(jìn)行酵母類固醇代謝輪廓的掃描，識(shí)別公認(rèn)抗真菌藥物的靶酶，與 Haploinsufficiency Profiling 一起更詳盡地闡明藥物抑制機(jī)理。 7200 GC/Q-TOF 的精確質(zhì)量信息和全譜圖的靈敏度可以對(duì)目標(biāo)物 及藥物治療蓄積形成的未知化合物進(jìn)行可靠的識(shí)別和定性。線性范圍高達(dá) 5 個(gè)數(shù)量級(jí)，可以對(duì)整個(gè)細(xì)胞濃度范圍內(nèi)的代謝物同時(shí)進(jìn)行測(cè)定。 用此方法對(duì)幾種潛在抗真菌的藥物包括 NCE1181-0519 和桃柘酮的 作用機(jī)理進(jìn)行了解析，這一過(guò)程通過(guò)經(jīng) Mass Profiler Professional 評(píng)估，中間體濃度發(fā)生顯著變化的樣本同時(shí)進(jìn)行靶標(biāo)分析和非靶標(biāo)分析實(shí)現(xiàn)的。此外，7200 GC/Q-TOF 通過(guò)精確質(zhì)量 MS/MS 產(chǎn) 物離子譜圖與 Molecular Structure Correlator 工具相結(jié)合，可對(duì)未知代謝物進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)和解析。