制備液相色譜以其高分離效率，重現(xiàn)性和低溶劑消耗而聞名，是一種純化技術(shù)。來自中國的色譜專家團(tuán)隊?wèi)?yīng)用了傳質(zhì)動力學(xué)建模和吸附等溫線，以改善該技術(shù)的缺點之一，即超載導(dǎo)致的非線性，這是純化工藝發(fā)展的重要問題。

1中國西南醫(yī)科大學(xué)的一組研究人員選擇了羥基酪醇與橄欖果和葉片中橄欖苦苷水解產(chǎn)生的其他成分同時生成的純化方法：

使用液相色譜島津LC-2030系列儀器進(jìn)行HPLC分析，該儀器配備有脫氣器，低壓梯度儀，混合器，自動進(jìn)樣器和柱箱，并與UV檢測器相連。在配備P680A泵，低壓梯度儀，帶有500μL樣品定量環(huán)的手動進(jìn)樣器，TCC 100柱溫箱和PDA 100檢測器的Dionex P680A系列儀器上進(jìn)行餾分收集。色譜條件為5％甲醇或乙醇水溶液。進(jìn)樣量5μL;柱溫40°C;檢測波長為280 nm。使用三根色譜柱（C8TDE，C18ME和C18TDE）在0.1至1.5 mL/min的15種不同流速下以0.1 mL/min的增量比較羥基酪醇的傳質(zhì)動力學(xué)。

為了精確確定變量對等效于理論塔板（HETP）的高度的影響，使用van Deemter方程，Gidddings方程，Horvath和Lin方程以及Knox方程計算了羥基酪醇的傳質(zhì)動力學(xué)。 van Deemter方程的三個項，即渦流擴(kuò)散（A項；由于固定相色譜柱的存在而導(dǎo)致的峰展寬，與流動相的速度無關(guān)），分子擴(kuò)散（B項）和傳質(zhì)阻力（C項） ），確定了三列中的兩種有機(jī)改性劑。隨后研究了吸附等溫線，以探討溶質(zhì)在固定相和流動相之間處于平衡狀態(tài)的分布。將濃度較高的羥基酪醇（10–160mmol/L）的標(biāo)準(zhǔn)溶液泵入C18TDE色譜柱，并記錄穿透時間。

在這項工作中，發(fā)現(xiàn)在5％甲醇-水條件下C8TDE和C18ME色譜柱的最佳線速度為6.37 mm/s（0.3 mL/min），在5％乙醇條件下為4.24 mm/s（0.2 mL/min）。以水為流動相。對于C18TDE色譜柱，發(fā)現(xiàn)5％甲醇-水的最佳線速度為14.85 mm/s（0.7 mL/min），而5％乙醇-水的最佳線速度為4.24 mm/s（0.2 mL/min）。發(fā)現(xiàn)C18TDE柱是最高效的色譜柱，傳質(zhì)動力學(xué)分析表明，乙醇是分離羥基酪醇的合適溶劑，因為帶有甲醇流動相的B項極其敏感，因此在改變其他條件時很難穩(wěn)定其性能。由于C18TDE的最小A項以及可接受的B和C值，因此它是最佳選擇。因此，選擇C18TDE和乙醇純化羥基酪醇是因為這種組合對變化不敏感，具有最佳的A，B和C項，并且符合Langmuir等溫線模型。羥基酪醇已成功純化，樣品量為1.6％，回收率為90.98％，純度為98.01％，以5％乙醇-水為流動相，采用了優(yōu)化的分餾方法，流速為0.2 mL/min。

2中國林業(yè)科學(xué)研究院，林產(chǎn)化學(xué)研究所等用油橄欖葉橄欖苦苷酶解制備羥基酪醇的研究：

使用島津LC-20AT-DAD高效液相系統(tǒng),島津UV-1800紫外可見分光光度計,ZWY-1 10X30型水浴搖床,PHS-3C型pH計,H1650高速臺式離心機(jī),SHB-3型循環(huán)水多用真空泵,KQ5200DE數(shù)控超聲波清洗器。

以1 g油橄欖葉提取物為原料,采用高效液相色譜法測定油橄欖葉橄欖苦苷(OE)和羥基酪醇(HT)的含量,篩選得到適合用于OE酶解制備HT的酶,通過單因素和正交試驗優(yōu)化酶解工藝,并考察了HT、OE和油橄欖葉提取物清除二苯基苦基肼(DPPH)自由基的抗氧化活性。結(jié)果表明,在相同酶活力條件下,半纖維素酶對OE的降解和HT的制備都有著很好的效果,其次為纖維素酶和β-葡萄糖苷酶。半纖維素酶降解OE的最佳工藝為溫度60℃、p H值5.5、酶量40 mg、時間6 h,得到HT質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6.07%,OE降解率為85.28%。酸解、堿解和酶解方法的比較結(jié)果表明,鹽酸水解后HT質(zhì)量分?jǐn)?shù)可達(dá)7.41%,效果略優(yōu)于酶水解;但Na OH水解后HT質(zhì)量分?jǐn)?shù)僅為4.09%。DPPH自由基清除實驗結(jié)果表明,DPPH自由基清除能力為HT>維生素C>OE>2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚>油橄欖葉提取物,HT的半數(shù)抑制質(zhì)量濃度(IC50)值可達(dá)1.07 mg/L。

液相色譜對于藥物提取，純化仍然是一個巨大的挑戰(zhàn)，因為結(jié)構(gòu)相似的化合物可以共存于基質(zhì)中，特別是對于從生物發(fā)酵或多肽合成中獲得的藥物而言。